病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的 探讨病毒灭活处理对2019新型冠状病毒核酸检测弱阳性结果的影响。方法 回顾性研究浙江大学医学院附属第二医院2020年1至2月2019新型冠状病毒不同浓度的3例实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测阳性患者的鼻咽拭子标本。采用不灭活处理和56 ℃ 30 min水浴、56 ℃ 60 min干浴及60 ℃ 30 min干浴3组灭活处理方式对鼻咽拭子保存液标本进行病毒灭活,提取RNA,然后3种商品化新型冠状病毒核酸实时荧光RT-PCR试剂分别进行检测,用循环阈值(Ct)评价病毒灭活对2019新型冠状病毒核酸检测结果影响。结果 灭活前ORF1ab基因Ct值分别为23.28±0.28、25.25±0.25、28.93±0.44、32.06±0.47、35.20±0.38、32.89±0.38、36.24±0.23、33.30±0.46,灭活后ORF1ab基因Ct值分别为灭活组1：23.60±0.20、27.29±0.30、31.83±0.51、37.41±0.46,灭活组2：24.25±0.34、27.18±0.42、31.84±0.61、34.99±1.01、34.89±0.45,灭活组3∶23.37±0.17、26.89±0.52、32.05±0.50；灭活前N基因Ct值分别为24.38±0.09、26.64±0.11、30.35±0.12、33.29±0.33、36.93±0.11、34.50±0.12、35.63±0.12,灭活后N基因Ct值分别为灭活组1：24.66±0.11、28.52±0.14、32.71±0.14、37.00±0.13,灭活组2：25.41±0.10、28.79±0.15、33.29±0.28,灭活组3：23.37±0.11、28.68±0.11、33.54±0.13、37.18±0.23。灭活前后扩增Ct值比较差异无统计学意义(ORF1ab基因：t=-1.416；N基因：t=-1.379,P均>0.05),3组灭活处理组间Ct值差异也无统计学意义(ORF1ab基因：t=-0.460；N基因：t=-0.132,P均>0.05)。但不同稀释倍数下的灭活组(1,2,3)与未灭活组Ct值比较,未灭活组和灭活组(1,2,3)Ct值差异有统计学意义。10×稀释：ORF1ab Ct值：未灭活组：25.25±0.25,灭活组1,2,3分别为27.29±0.30、27.18±0.42和26.89±0.52,t(ORF1ab)=-7.327,P0.05),3种试剂阳性检出率比较(试剂1：7/11、4/11、3/11、3/11,试剂2：8/11、4/11、3/11、3/11,试剂3：5/11、3/11、3/11、2/11),差异无统计学意义(χ2=1.199,P>0.05)。结论 病毒灭活处理会使2019新型冠状病毒核酸降解,导致检测Ct值增加,使低浓度标本出现假阴性结果。

【关键词】 冠状病毒属 病毒灭活 核酸类 实时聚合酶链反应

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